作者：王国丽 大宝贵嗣 山崎和生 Stefania Dank...钙离子atp酶serca1a转染细胞培养
摘要：目的评估不同转染及培养条件下COS1细胞过表达钙离子ATP酶SERCA1a的量及活性，探讨影响真核细胞目标蛋白质表达量及活性的因素。方法应用常规的全量或者半量DNA、lipofactamin和plus reagent转染COS1细胞，37℃、34℃或31℃培养2至5d。提取微粒体蛋白后定量并测定SERCA1a的ATP酶活性。结果微粒体蛋白量在细胞培养3至4d达到高峰，改变转染及细胞培养条件，未见明显变化；降低细胞培养温度及提高DNA转染用量，可增加SERCA1a表达量；SERCA1a表达量在8μgDNA转染细胞31℃培养3d达到最高，然而降低细胞培养温度后，SERCA1a的ATP酶活性及EP生成量也随之下降；31℃表达的SERCA1a，其ATP酶活性降低比EP生成量减少的幅度更大，并且ATP酶活性及EP生成量随着细胞培养时间延长而增加。结论应用常规的半量转染试剂、全量DNA瞬时转染COS1细胞，37℃培养3-4d可获得最大量具有正常酶活性的SERCA1a蛋白。降低培养温度虽然可以提高外源性SERCA1a的表达，但却可能影响细胞内蛋白质的准确折叠及正常降解。
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