作者：艾力麦尔旦·艾尼瓦尔; 李鹏; 刁兆峰; 木...成骨细胞颅盖骨改良酶消化法差速贴壁法分离培养鉴定兔组织构建颅骨细胞分离组织工程
摘要：背景:成骨细胞的提取分离尚无公认的高效简便的实验方法。目的:探讨用改良酶消化法体外分离、培养并鉴定新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞的实验方法。方法:实验利用成纤维细胞胰酶消化时脱壁早,终止消化后贴壁快的特点,采用改良酶消化法分离3d龄新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞并用差速贴壁法纯化培养。倒置显微镜每日观察细胞形态及其生长状况,采用MTT法检测细胞增殖情况并绘制细胞生长曲线,测定碱性磷酸酶含量,免疫组织化学染色法检测Ι型胶原、骨钙素,Runt相关转录因子2(Runt related transcription factor 2,RUNX2)表达,茜素红染色矿化结节等对成骨细胞及其生物化学特性进行鉴定。结果与结论:①成功分离提取并差速贴壁法纯化培养成骨细胞;②分离培养的成骨细胞贴壁生长,显示正常的成骨细胞形态和生长特征;细胞增殖能力良好;③细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素、RUNX2染色均阳性,常规培养21d茜素红染色形成矿化结节;④结果证实,改良酶消化法培养出的成骨细胞具有典型的成骨细胞特征,成分单一,存活率高。
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