作者：王志聪; 刘跃洪; 周庆; 陈曦; 周宇; 孙慧...骨髓间充质干细胞成软骨分化软骨细胞聚合体形态学蛋白多糖sox9转录因子干细胞国家自然科学基金骨髓间质干细胞细胞分化组织工程
摘要：背景:骨髓间充质干细胞在向软骨细胞分化过程中可形成聚合体,但是该形态学特点是否可代表骨髓间充质干细胞已经成软骨分化尚无研究报道。目的:观察骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中聚合体的形成和成软骨分化情况。方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,传代至第6代时备用。对照组用无血清LG-DMEM培养基培养14 d,诱导组用含转化生长因子β3的成软骨完全诱导培养基培养14 d,倒置显微镜观察诱导过程中细胞形态变化;免疫荧光染色、甲苯胺蓝染色、qRT-PCR检测成软骨特异指标Ⅱ型胶原、蛋白多糖和成软骨转录因子SOX9的基因表达及蛋白合成情况。结果与结论:①与对照组相比,诱导组骨髓间充质干细胞在第3天失去典型的成纤维形态,第7天开始形成成簇的单层聚合体,第14天形成直径更大的多层聚合体;②聚合体的免疫荧光染色及甲苯胺蓝染色均阳性,而聚合体外的单个细胞无特异染色;③qRT-PCR亦证实诱导组有成软骨特异基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX9表达;④上述研究结果提示骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中聚合体的形成可作为成软骨分化的一种形态学检测指标。
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