作者：宋君来; 李满; 孙麟; 马迅; 吕聪; 贺亚军脊髓损伤高迁移率族蛋白质类组织工程星形胶质细胞hmgb1细胞损伤干扰丙酮酸乙酯mttldh
摘要：背景：既往对于抑制大鼠体内高迁移率族蛋白1（high mobility group protein,HMGB1）的释放改善脊髓功能的恢复较多,但对于体外培养脊髓星形胶质细胞,抑制HMGB1改善细胞氧糖剥夺/复氧的损伤研究尚少。目的：探讨抑制大鼠脊髓星形胶质细胞HMGB1后减轻细胞氧糖剥夺/复氧的损伤作用。方法：星形胶质细胞从新生SD大鼠脊髓提取,分离,培养鉴定。实验分两部分：第一部分实验,体外培养大鼠脊髓原代星形胶质细胞,对细胞行氧糖剥夺/复氧处理,实验分组：对照组,正常培养;氧糖剥夺6 h/复氧6,12,24 h组。第二部分实验,星形胶质细胞分组：对照组,正常培养;氧糖剥夺6 h/复氧24 h组;特异性RNA干扰组;非特异性RNA干扰组;丙酮酸乙酯组。利用Western blot和ELISA法检测各部分实验各组星形胶质细胞HMGB1的表达和释放量,利用乳酸脱氢酶的漏出率和MTT法检测细胞的损伤和存活率,光镜下观察细胞损伤后细胞形态结构的变化。结果与结论：（1）脊髓星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后,HMGB1蛋白表达及分泌升高（P〈0.01）,且复氧至24 h时达到最高值（P〈0.01）;特异性RNA干扰组及丙酮酸乙酯组HMGB1的表达量明显降低,提示特异的HMGB1shRNA和丙酮酸乙酯能有效抑制HMGB1表达;（2）细胞氧糖剥夺/复氧后,乳酸脱氢酶漏出率均明显增加,细胞存活率降低（P〈0.01）,复氧至24 h时损伤最为严重（P〈0.01）。与氧糖剥夺6 h/复氧24 h组相比,特异性RNA干扰组及丙酮酸乙酯组细胞的乳酸脱氢酶漏出率明显下降;（3）光镜下观察细胞在氧糖剥夺/复氧后,细胞出现肿胀,分解等损伤变化,而特异RNA干扰和丙酮酸乙酯组细胞损伤明显减轻;（4）结果提示,HMGB1在脊髓星形胶质细胞损伤发生与发展中起到关键性的作用,且抑制HMGB1后能减轻氧糖剥夺/复氧对大鼠脊髓星形胶质细胞的损伤作用。
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