作者：秦晗; 龚永庆; 徐宏志基因成骨细胞慢病毒属组织构建runx2基因慢病毒转染
摘要：背景：研究表明成骨细胞特异性转录因子（Runx2）的杂合突变、基因插入、缺失等是造成颅骨锁骨发育不全的重要原因。目前关于Runx2基因沉默后成骨细胞功能会发生怎样的变化,及如何沉默成骨细胞Runx2基因表达的相关研究未见报道。目的：构建靶向Runx2基因的小鼠成骨样细胞MC3T3-E1慢病毒载体,为颅骨锁骨发育不全的研究提供实验依据。方法：根据预实验结果在含5 mg/L Polybrene的ENi.S培养液中,病毒按MOI=40进行感染,按病毒序号分为4组：NC组：pFU-GW-016PSC53349-1;KD1组：LVpFU-GW-016PSC60107-1;KD2组：LVpFU-GW-016PSC60108-1;KD3组：LVpFU-GW-016PSC60109-1。转染后16 h换液,72 h后,Celigo全视野细胞扫描分析仪观察检测基因的表达情况;两步法进行Real-Time PCR检测Runx2基因的沉默效果。结果与结论：（1）病毒转染后72 h,NC组未见荧光表达;KD1组可见少量荧光表达;KD2组荧光表达增强;KD3组可见强绿色荧光;（2）Real-Time PCR结果提示KD3组获得较好Runx2基因沉默效果;（3）实验成功构建靶向Runx2基因的MC3T3-E1细胞慢病毒载体,筛选出特异性抑制成骨细胞Runx2基因的病毒,并初步确定其作用的时间、相应的计量。
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