作者：向勇; 李广恒骨骼肌筋膜细胞间充质干细胞软骨细胞骨形态发生蛋白4细胞分化种子细胞成肌细胞国家自然科学基金肌骨骼筋膜组织工程
摘要：背景:骨骼肌中的肌源性细胞在骨形态发生蛋白4与转化生长因子β3的作用下具有成软骨分化的能力,但由于骨骼肌组成复杂,其中包括肌纤维组织、筋膜组织、血管组织、神经组织等,所以其中具备向软骨分化能力的细胞组织来源尚未确定。目的:观察骨骼肌中筋膜源性细胞分化成软骨细胞的能力,以明确骨骼肌来源的细胞中具有成软骨分化能力的种子细胞。方法:分离大鼠的臀大肌筋膜组织,剪成细小组织块后于含骨形态发生蛋白4和转化生长因子β3的软骨形成培养基中培养,在第14天收集样本,使用阿尔新蓝、苏木精-伊红染色和番红O染色来鉴定筋膜源性细胞的成软骨细胞分化能力;使用结蛋白、CD34、波形蛋白、v-WF和α平滑肌肌动蛋白相应抗体的免疫染色来研究筋膜源性细胞上各种不同细胞标志物在的表达情况;筋膜源性细胞与L6大鼠成肌细胞不同比例混合(1∶0,4∶1,1∶1,1∶4,0∶1),用免疫染色方法分析筋膜源性细胞和L6细胞分化成软骨细胞的能力。结果与结论:①当在软骨形成培养基中培养第14天时,在阿尔新蓝和番红O免疫染色为阳性结果,表明筋膜组织块中的细胞具有分化成软骨细胞的能力;②分离的筋膜源性细胞的结蛋白,CD34、v-WF抗原和α平滑肌肌动蛋白的表达是阴性的,但超过90%的细胞表达波形蛋白;③纯筋膜源性细胞成软骨分化能力最强,随着L6大鼠成肌细胞比例增高,其成软骨分化能力逐渐下降;④结果提示,从骨骼肌中筋膜源性细胞表面标记物分析、免疫染色及筋膜源性细胞与L6大鼠成肌细胞混合培养对比后,表明筋膜源性细胞具有分化成软骨细胞的能力,是骨骼肌来源的细胞中具有成软骨能力的种子细胞。
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