作者：李萍; 王久存; 陆瑶; 许惠利羊膜上皮细胞成脂分化组织工程干细胞分化羊膜上皮细胞诱导分化成脂细胞成骨细胞成软骨细胞
摘要：背景：人羊膜上皮细胞来源稳定,正逐渐成为广受关注的再生医学种子细胞来源。目的：建立人羊膜上皮细胞体外分离培养、成脂、成软骨、成骨诱导分化的方法。方法：通过胰蛋白酶消化法从人胎盘羊膜中分离羊膜上皮细胞,进行体外培养与鉴定,观察培养12 d内的细胞生长曲线。取P1代羊膜上皮细胞,分别进行成脂、成软骨、成骨诱导,以常规培养细胞为对照,诱导16 d后,分别进行油红O染色、Masson染色及碱性磷酸酶染色,同时采用荧光定量PCR检测诱导过程中成脂转录因子、Ⅱ型胶原蛋白、骨桥蛋白、碱性磷酸酶m RNA表达变化。结果与结论：（1）从人羊膜中分离出的羊膜上皮细胞,免疫荧光检测表达上皮细胞标记物CK19;（2）P1代细胞具有较强的分裂增殖能力,P2细胞与P1相比增殖能力略有下降,P3细胞增殖能力最差;（3）羊膜上皮细胞经成脂、成软骨、成骨诱导后,油红O染色有红色脂滴,Masson染色有亮蓝色软骨基质,碱性磷酸酶染色有红褐色钙结节;随着诱导时间的延长,成脂转录因子、Ⅱ型胶原蛋白、骨桥蛋白、碱性磷酸酶表达量升高;（4）结果表明,采用酶消化法可从人羊膜中分离得到羊膜上皮细胞,羊膜上皮细胞可向脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞分化。
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