作者：董金辉; 任秀敏; 徐鸥; 王建星干细胞组织工程鼻窦炎脐带脐血干细胞鼻黏膜上皮细胞人脐血干细胞气液界面培养法分化鼻黏膜纤毛上皮细胞muc8foxj1
摘要：背景：鼻黏膜纤毛上皮细胞受损后导致鼻黏膜生物功能严重创伤。相对于其他成体干细胞,人脐血干细胞具有更好的诱导分化潜能。目的：观察人脐血干细胞通过体外培养、诱导分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞的可行性。方法：收集正常健康人脐血,分离人脐血干细胞,通过体外培养,鉴定干细胞表面标记物后进行传代培养;取第3代脐血干细胞,用携带增强型绿色荧光蛋白重组腺相关病毒进行感染,采用气液界面培养法,分别于诱导感染1,2周后对干细胞进行MUC8基因PCR检测。在脐血干细胞培养3周后进行FOXJ1免疫荧光染色。结果与结论：（1）培养鉴定结果：原代人脐血干细胞传代至第3代时,细胞形态较均一,折光性良好,可表达干细胞表面标记物;（2）转染鉴定结果：细胞转染3 h后,可见第3代干细胞呈现出绿色荧光,培养48 h后,流式细胞仪检测细胞阳性率达96.2%,说明干细胞转染效果很好;（3）RT-PCR检测：人脐血干细胞MUC8 m RNA无表达,而鼻黏膜上皮细胞MUC8 m RNA呈现出强表达,培养1周时MUC8mRNA呈现弱表达,培养2周后有一定的增强;（4）免疫荧光染色：在转染的绿色荧光蛋白背景下可观测到FOXJ1红色荧光呈现阳性表达结果;（5）结果说明：人脐血干细胞在适宜培养条件下可分化为鼻黏膜纤毛上皮细胞。
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