作者：廖乃顺; 李钻芳; 林如辉; 陈文列; 黄云梅...组织构建成骨细胞矿化结节扫描电镜术能谱分析激光扫描共聚焦显微镜术四环素染色茜素红染色国家自然科学基金
摘要：背景：矿化结节是成骨细胞分化成熟的标志，以往观察方法多采用茜素红等特殊染色法。目的：比较茜素红染色-光镜、四环素荧光标记-激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜3种形态学观察成骨细胞矿化结节的方法，分析各自的特点及在骨病研究中的应用价值。方法：将大鼠成骨细胞株UMR-106正常培养、每天换液，连续培养14 d，分别采用茜素红染色-光镜、四环素荧光标记-激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜观察矿化结节的形态结构，并利用扫描电镜结合能谱仪原位定量分析钙元素；此外，在培养中加入可抑制成骨细胞增殖、分化的肿瘤坏死因子α作为对照实验。结果与结论：3种观察方法均可观察到正常成骨细胞矿化结节的形态结构。对于肿瘤坏死因子α抑制成骨细胞产生矿化结节的情况，经茜素红染色-光镜观察法，未见明显的矿化结节；而四环素荧光染色-激光扫描共聚焦显微镜观察法，可见清晰、稀少的矿化结节；扫描电镜观察法明显可见较少而细小的矿化结节，提示后二种方法灵敏度较高。此外，扫描电镜可将观察成骨细胞分泌钙质、形成矿化结节的亚细胞结构，与能谱元素分析结合，可实现矿化结节的定位与定量，在骨病研究中值得推广应用。
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