作者：卜令学; 荆恒; 陈立强; 高振华; 李宁毅细胞片层骨髓基质干细胞温度变化密度梯度离心法组织工程骨犬
摘要：背景：目前传统的胰酶消化法和单细胞悬液转移细胞的方法存在诸多缺点,限制了骨组织工程学的发展。目的：培养骨髓基质干细胞并向成骨细胞诱导分化,制备细胞片层。方法：密度梯度离心法分离犬骨髓基质干细胞,接种于DMEM成骨诱导培养基,向成骨细胞诱导分化,采用细胞片层技术,利用温度反应性培养基的温度变化,收获完整的细胞片层。结果与结论：刚接种至培养皿的原代细胞在培养瓶底散在分布,呈圆形,胞体透亮,折光性好,12d时细胞呈长梭形,完全融合,呈旋涡状生长;成骨诱导后的骨髓基质干细胞大部分变为方形、多角形和鳞片形,21～28d形成明显的圆形或卵圆形钙化结节;温度反应性培养皿中的间充质干细胞降温至临界温度32℃以下时,细胞便逐步从培养皿底分离,形成完整的骨髓基质干细胞片层。实验结果证实密度梯度离心法可成功分离培养犬骨髓基质干细胞并向成骨细胞诱导分化,应用细胞片层技术可获取完整的骨髓基质干细胞片层。
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