作者：李国栋; 鄢文海; 邢莹五味子酮tau蛋白过磷酸化app转基因小鼠
摘要：背景：华中五味子酮有强的抗氧化活性，可高效清除羟自由基和超氧阴离子，对处于活性氧应激状态下的细胞具有保护作用。神经元内神经原纤维缠结主要是由异常磷酸化的Tau蛋白组成，与阿尔茨海默病的严重程度呈正相关。 目的：探讨五味子酮在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化成神经细胞的过程中对Tau蛋白磷酸化的作用。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察，于2006-07／2008—10在郑州大学医学实验中心完成。 材料：自中国协和医科大学遗传动物中心购得APP基因突变小鼠30只，五味子酮由河南省中医研究院药物所提供。方法：剪取新生APP转基因小鼠尾尖，常规提取DNA，采用PCR法检测动物是否携带有APP基因。APP转基因阳性鼠记为“APP＋”，APP转基因阴性鼠记为“APP＋”。分别取APP＋鼠和APP＋鼠海马部位脑组织，体外分离培养神经干细胞，并将纯化的神经于细胞向神经细胞方向诱导分化。将从APP＋鼠来源的细胞分为五味子酮组、APP＋细胞对照组，将APP-鼠来源的细胞设为APP-细胞对照组。五昧子酮组向细胞培养液中加入终浓度为50umol／L的五咪子酮溶液，余2组加入相同容积的PBS，培养24h。主要观察指标：免疫荧光化学和免疫印迹分析测定APP＋、APP-细胞Tau蛋白在262、396位点的磷酸化水平。结果：与APP＋细胞对照组比较，五味子酮组细胞荧光强度减轻，Tau[Ps262]、Tau[Ps396]的磷酸化水平均降低，且Tau[Ps396]位点的磷酸化水平降低尤为明显。APP＋细胞对照组Tau[Ps262]、Tau[Ps396]磷酸化水平均较低。结论：在APP转基因小鼠神经干细胞诱导分化过程中，五味子酮可以明显降低Tau蛋白在396、262位点的磷酸化水平，减轻神经元损伤，但其磷酸化程度并未达到阴性细胞水平。
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