作者：李瀚旻; 晏雪生; 罗建君; 李晶津; 高翔; ...左归丸含药血清肝细胞骨髓间质细胞
摘要：目的：一些实验已证实骨髓干细胞可以向肝细胞横向分化，观察补肾中药左归丸含药血清对骨髓间质细胞分化为肝细胞的影响。方法：实验于2002-01／2004-12在湖北中医学院附属医院肝病研究所完成。①实验动物：选取SPF级纯系Wistar大鼠46只，1只用于骨髓间质细胞的分离及培养，剩余45只用于含药血清的制备。另取2d龄Wistar乳鼠20只，用于肝脏细胞的培养。②实验方法：以体外肝细胞培养上清为诱导条件培养液，采用贴壁分离法纯化大鼠骨髓间质细胞。45只Wistar大鼠依次取15只用生理盐水、中药左归丸（由熟地、淮山药、枸杞子、山茱萸、菟丝子、川牛膝、鹿角胶、龟版胶组成）浓缩煎剂、中药八珍汤（由人参10g，白术10g，茯苓10g，甘草6g，当归15g，川I芎10g，白芍15g，熟地15g组成）浓缩煎剂按10mUkg灌胃，灌胃量以生药10g，kg计算，1次，d。第15天灌胃后2h，腹腔麻醉颈动脉插管取血，分管盛装含药血清，放置备用。大鼠骨髓间质细胞传至6代，分6组诱导培养：常规培养组使用常规培养液（DMEM培养液＋体积分数为0.2的胎牛血清＋2mmol／L谷氨酸胺）进行培养；肝细胞生长因子诱导组以常规培养液＋25μg／L肝细胞生长因子＋10^-7mol／L地塞米松进行培养；肝细胞生长因子加左归丸组以常规培养液＋25μg／L肝细胞生长因子＋10^-7mol／L地塞米松＋10％左归丸含药血清进行培养；条件培养液加对照血清组以常规培养液＋50％条件培养液＋10％正常大鼠血清进行培养；条件培养液加八珍汤组以常规培养液＋50％条件培养液＋10％八珍汤含药血清进行培养；条件培养液加左归丸组以常规培养液＋50％条件培养液＋10％左归丸含药血清进行培养。⑧实验评估：诱导28d，每组10个复孔，分别于诱导第0，7，14，21，28天免疫细胞化学法检测肝细胞标志物甲胎蛋白、细
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