作者：曾名勇; 陈胜军; 李来好; 李八方罗非鱼属胶原蛋白血管紧张素类肽类
摘要：背景：从红非鲫鱼皮胶原蛋白酶解产物中分离血管紧张素抑制肽有待研究。 目的：通过酶解红非鲫鱼皮胶原蛋白获取具有高血管紧张素转换酶抑制活性的肽。 设计：采用正交实验法进行复合酶解。采用超滤、凝胶柱层析和高压液相色谱技术进行降压肽的分离。单位：中国海洋大学水产品高值化利用实验室。 材料：体质量（500±50）g红非鲫，由即墨热电厂罗非鱼分厂提供。 方法：实验于2003—05／2004-05在中国海洋大学水产品高值化利用实验室完成。①采用稍作改进的Grossman和Bergman法提取红非鲫鱼皮胶原蛋白，通过菠萝蛋白酶和alcalase2．4L组成的复合酶依次对胶原蛋白进行水解。将红非鲫鱼皮胶原蛋白水解物煮沸使酶失活。得到的红非鲫鱼皮胶原蛋白水解物通过截流相对分子质量分别为6000，4000，1000的超滤膜进行分离。得到3个组分，红非鲫鱼皮腔原蛋白水解物Ⅰ（相对分子质量6000-4000）、红非鲫鱼皮胶原蛋白水解物Ⅱ（相对分子质量4000—1000）和红非鲫鱼皮胶原蛋白水解物Ⅲ（相对分子质量小于1000）。②按照cushman等人的方法测定各组分的血管紧张素转换酶抑制活性。将抑制50％的血管紧张素转换酶活性所需抑制剂浓度定义为IC50。③将具有最高血管紧张素转换酶抑制活性的红非鲫鱼皮胶原蛋白水解物上预先采用1．0mol／L乙酸缓冲液（内含0．1％v／v毗啶，pH=4．0）平衡的sephadexG-25柱（1．6×100cm），检测波长220nm，对水解原液。RTCH-Ⅰ、RTCH-Ⅱ和RTCH-Ⅲ4个样品进行分离。收集活性峰。对每个活性峰测定其血管紧张素转换酶抑制率。冻干后进一步用反相HPLCODS-C18分析柱分离。得到各组的高活性组分，同样方法测定其血管紧张素转换酶抑制率。④对4种高活性组分组分的样品均在110℃下用内含1g／L硫代乙醇酸的6mol／L HCl真空水解，采用氨�
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