作者：刘东华; 刘慧雯; 徐良德; 曾明细胞克隆人绒毛膜促性腺激素去核细胞移植最佳组织工程研究中心第一极体组织学与胚胎学哈尔滨医科大学相对位置染色质干细胞培养治疗性克隆卵母细胞数不同时间位置关系细胞来源昆明小鼠超数排卵显微镜下
摘要：目的:治疗性克隆应用于临床中需有效解决体细胞克隆及干细胞培养两大技术.观察注射人绒毛膜促性腺激素后不同时间体内成熟卵母细胞MⅡ期染色质与第一极体相对位置,确定以第一极体为标志,盲吸法去核时间和与染色质的位置关系,解决克隆过程中卵母细胞来源与去核率.方法:实验时间为2004-09/11,实验地点为哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室组织工程研究中心层流实验室.4～6周雌性昆明小鼠在明暗循环的环境饲养,做超数排卵处理.卵母细胞用含10 mg/LHoechest33342的M2液染色5 min,在Olymopus荧光显微镜下经紫外荧光激发,观察MⅡ期染色质与第一极体的相对位置,并且用不同的角度记录(0°～30°,30°～90°和90°～180°).Moteic软件测量卵周隙,明确卵周隙变化规律.结果:①注射人绒毛膜促性腺激素12 h,开始排卵,可见第一极体的卵母细胞占72.22%,23.08%第一极体已开始退化.排卵后,随着卵母细胞在体内的老化,退化的第一极体增多,到注射人绒毛膜促性腺激素19 h退化第一极体的比率达到100%,可见第一极体的卵母细胞比率降到7.14%.②注射人绒毛膜促性腺激素12和14 h MⅡ期染色质与第一极体位置比邻,在0°～30°区域的卵母细胞较其他时间段多,为61.54%和50%;注射人绒毛膜促性腺激素13和17 h的卵母细胞MⅡ期染色质与第一极体位置以在30°～90°区域为主;注射人绒毛膜促性腺激素15 h MⅡ期染色质与第一极体位置在0°～30°和90°～180°区域的卵母细胞数相等,为30.77%,且少于30°～90°区域的卵母细胞(38.46%);注射人绒毛膜促性腺激素16,18和19 h MⅡ期染色质与第一极体位置在90°～180°区域的卵母细胞逐渐增多,注射人绒毛膜促性腺激素19 h达到最大值66.67%.③卵周隙随卵母细胞在体内的老化逐渐增大.结论:注射人绒毛膜促性腺激素12 h可以进行小鼠卵母细胞去核操作,注射人绒毛膜促性�
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