作者：牛敬忠; 李天富; 夏作理; 吕传真; 罗玉敏...癫痫红藻氨酸海马半胱氨酸蛋白酶类
摘要：目的:观察大鼠边缘叶癫痫发作前后局部脑血流变化,验证半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在癫痫大鼠脑海马CA3区神经元中表达与其神经元凋亡的关系.方法:实验于2002-05/2003-10在教育部重点实验室复旦大学华山医院神经病学研究所完成.选取清洁级SD雄性大鼠60只,随机分为5组.分组情况:①正常对照组6只,杏仁核内注射0.5μL磷酸缓冲液,其余4组均完成造模过程,杏仁核内注射红藻氨酸0.5μg溶于0.5μL的磷酸缓冲液中,pH值调至7.4.②单纯癫痫组36只,根据处死大鼠的时间点分为0,2,4,8,24,72 h 6组,6只/组,癫痫发作1 h后经股静脉注射安定终止发作.③实验给药组6只,脑室内注射半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3抑制剂z-DEVD-fmk.④实验对照组6只,脑室内注射磷酸缓冲液.⑤空白对照组6只,脑室和杏仁核内均注射磷酸缓冲液.结果判定:①观察癫痫发作后双侧脑灌注率的变化,以癫痫发作前10 min的脑血流为基线,计算发作后占相应基线的百分率.②观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3抑制剂对癫痫发作同侧脑海马CA3区TUNEL阳性细胞(凋亡细胞)和存活神经元的影响.③观察癫痫发作同侧脑海马CA3区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3细胞凋亡线粒体通路效应酶脑内的表达.结果:共60只大鼠进入结果分析.①单纯癫痫4 h组癫痫发作前后局部脑血流无明显变化,双侧脑灌注率波动范围在10%以内.②脑室内注射半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3抑制剂可减少TUNEL阳性细胞,增加存活的神经元.③正常对照组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在脑神经元内构成性表达主要分布于神经元细胞核周围;单纯癫痫组癫痫发作终止24 h时同侧脑海马CA3区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3弥散于部分神经元的整个细胞,即免疫反应性增强.结论:①癫痫大鼠发作时脑灌注率波动较小,局部脑血流无明显变化,说明其神经元凋亡与脑缺血无关.②给予半胱氨酸天冬氨酸蛋
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