作者：傅静奕; 李焱; 严励; 张淼; 陈黎红; 傅祖...甘精胰岛素游离脂肪酸胰岛素样生长因子1hoechst33342中山大学附属第二医院普通胰岛素医学科学研究中心酶联免疫吸附反应正常对照组细胞裂解液体积分数胎牛血清牛血清白蛋白诱导细胞凋亡流式细胞仪
摘要：目的:观察甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的β细胞(RIN-m细胞)凋亡是否具有保护作用,并与普通胰岛素及胰岛素样生长因子1的干预效果进行对比.方法:本实验于2004-05/2004-10在中山大学附属第二医院林百欣医学科学研究中心完成.RIN-m细胞被培养并常规培养传代.诱导凋亡接种于6孔板或者96孔板后常规培养2 d,待细胞长至70%满左右时,吸去培养基,加入含10 g/L血清白蛋白,10 mL/L乙醇,20 mL/L胎牛血清的培养基(正常对照组),或者含10 g/L血清白蛋白,体积分数为0.01乙醇、体积分数为0.02胎牛血清和0.3 mmol/L棕榈酸的培养基(凋亡对照组),或者含10 g/L牛血清白蛋白,体积分数为0.01乙醇、体积分数为0.02胎牛血清,0.3 mmol/L棕榈酸以及100 nmol/L甘精胰岛素(甘精胰岛素组)或者100 nmol/L普通胰岛素(普通胰岛素组)或者10 nmol/L胰岛素样生长因子1组的培养基,孵育24 h后,将细胞接种于6孔板,诱导细胞凋亡.采用Hoechst33342染色、流式细胞仪以及酶联免疫吸附反应方法检测各组RIN-m细胞的凋亡,吸光度值代表细胞裂解液中核小体的数量,即DNA断裂的数量.结果:0.3 mmol/L棕榈酸孵育后RIN-m细胞出现核皱缩、碎裂等典型凋亡表现.①甘精胰岛素组、普通胰岛素组、胰岛素样生长因子1组亚二倍体细胞比率[(32.00±3.08)%,(35.97±3.14)%,(25.25±1.66)%]明显高于正常对照组[(3.28±1.44)%](P＜0.01);但明显低于凋亡对照组(42.10±4.24)%(P＜0.01).②甘精胰岛素组、普通胰岛素组、胰岛素样生长因子1组细胞裂解液中核小体的数量(A值)(2.372±0.21,2.758±0.20,1.704±0.16)明显高于正常对照组(0.341±0.023)(P＜0.01);但明显低于凋亡对照组(3.333±0.23)(P＜0.01).甘精胰岛素组和胰岛素样生长因子1组裂解液中核小体的数量(A值)明显低于普通胰岛素组(P＜0.05).结论:甘精胰岛素对游离脂肪酸诱导的β细胞凋亡具有抑制作用,该种作用强于普通胰岛素.
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
