作者：Liu; Xian-jun; 刘方欣; 漆洪波分离和纯化基因表达
摘要：背景:瘦素是脂肪组织产生的一种激素,具有广泛的生理作用,也是近年能量代谢研究的热点之一,所用瘦素主要是大肠杆菌的表达产物,后者以不溶解的包含体形式存在,需要通过烦琐的复性过程才能获得具有生物学活性的人瘦素.目的:为获得天然溶解形式的人瘦素,探索其非亲和层析纯化条件,为进一步可能的产业化提供依据.设计:实验观察.单位:一所医学院的生化教研室分子生物学实验室.材料:选择强阴离子交换剂(Sepharose Q)和疏水介质(Phenyl Sepharose 6)在条件下进行层析的方法,以尽可能除去样品中的杂质.方法:将培养获得的上清液在pH 7.5的条件下首先经过Q柱柱层析纯化,收集目的蛋白;随后在高盐[mol/L(NH4)2SO4]状态下通过疏水层析进一步纯化.主要观察指标:经凝胶扫描分析,纯化前的培养上清液人瘦素纯度为42.3%,Q柱柱层析纯化后纯度达到89.6%,疏水层析进一步纯化后纯度达到96.2%.结果:纯化产物在SDS-PAGE上呈现单一条带.经凝胶扫描分析,纯化前的培养上清液人瘦素纯度为42.3%,Q柱柱层析纯化后纯度达到89.6%,疏水层析进一步纯化后纯度达到96.2%.结论:通过强阳离子交换层析和疏水层析的合并应用,可将毕赤酵母表达系统表达的人瘦素进行有效纯化,纯度可达镍柱亲和层析的纯化结果,为进一步可能的产业化生产人瘦素提供了可靠依据和方法,为围绕瘦素的相关领域研究奠定了实验学基础.
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