作者：张忠荣; 王爱民; 王晓军; 吴思宇; 王子明...人护骨素转基因治疗破骨细胞骨骼疾病腺病毒基因表达细胞功能
摘要：背景:转基因治疗骨科系统疾病一直是骨科治疗的难点,构建携带有效基因的病毒是目前治疗因破骨细胞功能异常亢进的骨骼系统疾病的研究方向. 目的:构建携带人护骨素(human osteoprotegerin,hOPG)基因的重组腺病毒及其在大鼠体内共同表达.设计:单一样本研究.单位:解放军第三军医大学大坪医院全军战创中心骨创科.材料:实验在解放军第三军医大学烧伤研究所移植免疫实验室完成.材料:质粒PUC19-hOPG;穿梭质粒pAdTrack-CMV及腺病毒基因组:pAdeasy-1,293细胞株;限制性内切酶 EcoRI,EcoRV,BamHI,KpNI,PmeⅠ,PacⅠ,PCR引物.方法:将hOPG基因片段插入到含有GFP基因的穿梭质粒pAdTrack-CMV上,与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带hOPG和GFP基因的重组腺病毒(Adeasy-Adtrack-CMV-hOPG,Ad-hOPG).经大鼠尾静脉注射109 pfu的Ad-hOPG,在不同时相处死大鼠取其心、肝、肾、脾等组织观察重组腺病毒在体内表达特点.主要结局观察:①重组质粒转染293细胞后,观察是否有绿色荧光蛋白的表达.②所获得的重组腺病毒基因组是否含有hOPG基因.③重组腺病毒Ad-hOPG所携带的基因是否能在大鼠体内表达蛋白,及表达时象特点.结果:成功地构建了高滴度的携带hOPG基因的重组腺病毒,并能在体内大量表达,长达24 d.结论:成功的构建了高滴度的Ad-hOPG,并初步取得了hOPG重组腺病毒体内表达特点.
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