作者：毕胜; 王德生; 韩丽丽; 王雪婷; KAO; Yan...肌营养不良一氧化氮合酶抑制蛋白印迹法蛋白质
摘要：目的:观察肌营养不良症模型鼠(mdx)肌肉组织神经元型一氧化氮合酶抑制蛋白(protein inhibitor of nNOS,PIN)的表达及定位,以及与dys-trophin复合物及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的关系.方法:取mdx鼠(18只,实验组)和C57BL/10ScSn鼠(15只对照组)骨骼肌作常规染色,比较其组织学改变;同时对mdx鼠,C57BL鼠骨骼肌作Northern blot和固定化蛋白质印迹法(Western blot)及免疫组化分析.结果:Northern blot分析发现,mdx鼠肌肉组织PIN mRNA显著高于C57BL/10ScSn鼠,对照组骨骼肌有少量PIN mRNA表达,其杂交斑点A值为1 352.4±219.7,mdx组杂交斑点灰度A值为2 724.2±394.6,两者差异有非常显著性意义(t=11.985,P＜0.05);固定化蛋白质印迹法(Western blot)显示,PIN蛋白的杂交信号在mdx组与对照组均出现在约8 ku处,两者的吸光度平均值(A)几乎相等,mdx组的杂交斑点灰度A值为2 378.2±486.7,对照组PIN蛋白的杂交斑点灰度A值为2 438.5±494.9,两者差异无显著性意义(t=0.352,P＞0.05);免疫组化及激光共聚焦扫描显微镜均揭示,在C57BL/10ScSn鼠肌纤维中,PIN蛋白在肌膜、周边核附近呈强阳性表达,肌质中弱表达,而mdx鼠的PIN蛋白在肌膜及中心核附近呈强阳性表达,细胞质中亦弱表达;PIN于mdx鼠肌纤维表达明显,而nNOS及dystrophin复合物表达明显减少.结论:PIN并非是骨骼肌纤维内dystrophin复合物的一个组成部分;mdx鼠肌纤维PIN的表达受到诸多因素的调控,不同于nNOS及dystrophin复合物.
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