作者：张凤珍; 孙凌云; 翟静; 蒋汉明; 史仁玖; ...动脉粥样硬化淀粉样变性疾病发病机制血清淀粉样蛋白p血浆脂蛋白相互作用
摘要：目的:研究人血清中淀粉样蛋白P(serum amyloid P,SAP)与血浆脂蛋白中高密度脂蛋白(high densitylipoprotein,HDL)、极低密度脂蛋白(verylow density lipoprotein,VLDL)和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)相互作用机制,为了解动脉粥样硬化和淀粉样变性疾病的发病机制提供理论依据.方法:①Sepharose 4B(Pharmacia)亲和层析法提取人血清SAP,DEAE-Sepharose层析纯化.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与标准SAP(Sigma)检测.②采用免疫探针生物素化试剂盒(Sigma)以1:10比例接合于生物素氨基己酸-N-羟基-硫琥珀酰亚胺酯.得到生物素-SAP.③VLDL,LDL,HDL用超速离心法分离.④以四甲基联苯胺(TMBZ)底物试剂盒用固相平板测定法检测SAP与脂蛋白相互结合.结果:①生理条件的Ca2+水平下,生物素-SAP以剂量依赖方式选择性地与HDL,VLDL结合.当SAP水平分别达到1.5 nmol/L和2 mol/L时,SAP与HDL, VLDL的结合达到半饱和,当SAP水平达到4 nmol/L和16 nmol/L时,SAP与HDL,VLDL结合达到饱和.②SAP与HDL和VLDL的结合具有Ca2+依赖性.③EDTA可影响SAP和HDL,VLDL结合.④无论有无Ca2+和EDTA存在,未发现SAP和LDL间的结合.结论:SAP与HDL和VLDL结合而不与LDL结合.
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