作者：高瑞瑞; 周良; 丁振华a431细胞凋亡皮肤鳞状细胞癌
摘要：目的观察抗凋亡蛋白抑制剂ABT-263对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431细胞功能的影响，并探讨相关分子机制。方法①取对数生长期的人永生化表皮细胞（HaCaT细胞）与A431细胞提取总蛋白，采用蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2（BCL-2）和BCL—xL的蛋白表达水平。②分别以浓度为50Ixmol／L的ABT-263（抑制剂组）和二甲基亚砜（对照组）处理A431细胞，培养4和9h后，采用透射扫描电子显微镜（TEM）检测各组细胞的形态变化。③以剂量为0、10、25、40和50txmol／L的ABT-263处理A431细胞24h后，采用CCK-8法检测细胞活力。④以不同剂量的ABT-263处理A431细胞，采用蛋白印迹法检测活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-3）、活化聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1（PARP-1）、磷酸化蛋白激酶B（pAKT）ser473、磷酸化糖原合成酶激酶-3p（pGSK3p）和磷酸化组蛋白H2AX（YH2AX）的蛋白相对表达水平。结果A431细胞中的BCL-2和BCL—xL蛋白相对表达水平均高于HacaT细胞（P〈0．01）。TEM检查结果显示，抑制剂组A431细胞从正常的形态逐渐变化为凋亡的形态，表现为微绒毛消失，核染色质密度增高并凝聚在核膜周边，核仁裂解。10、25、40和50tzmol／L剂量组A431细胞的细胞活力均低于对照组（P〈0．05）。10、30和50μmol／L剂量组A431细胞的活化Caspase-3和活化PARP-1蛋白的相对表达水平均高于对照组（P〈0．05）。10、25、40、50μmol／L剂量组A431细胞的pAKT（ser473）和pGSK313的蛋白相对表达水平均低于对照组（P〈0．05），yH2AX蛋白相对表达水平高于对照组（P〈0．05）。A431细胞活力和pGSK313蛋白相对表达水平均随抑制剂剂量的增加而减少（P〈0．01），活化Caspase-3和YH2AX的蛋白相对表达水平均随抑制剂剂量的增加而增加（P〈0．01），均呈剂量-效应关系。结论ABT-263可诱导A431细胞发生线粒体途径的凋亡，并可诱导AKT／
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