作者：张婷; 李立荣; 王姗姗; 赵宇卿; 张淑惠; ...载脂蛋白e基因pc12细胞慢病毒转染基因重组聚合酶链反应麦芽酚铝
摘要：目的 建立人源性载脂蛋白E4（ApoE4）基因转染的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞（以下简称“PC12细胞”）,探讨麦芽酚铝对该细胞株细胞活力的影响。方法 将携带有人源性ApoE4基因重组慢病毒载体转染PC12细胞株,用嘌呤霉素进行筛选,获得ApoE4稳定过表达PC12细胞株（PC12-ApoE4组）和阴性空载体对照PC12细胞株（PC12-NC组）。采用实时荧光定量聚合酶链反应法分别检测PC12组、PC12-NC组、PC12-ApoE4组细胞的R-ApoE和（或）H-ApoE-FLAG的mRNA相对表达量,以鉴定构建效果。分别用浓度为0.00、100.00、200.00和400.00μmol/L的麦芽酚铝溶液对PC12-ApoE4组和PC12组细胞染毒24 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率。结果 PC12-ApoE4组、PC12-NC组细胞荧光显微镜下均可见荧光表达,提示转染成功;PC12组细胞未见荧光表达。PC12组细胞R-ApoE基因、PC12-NC组细胞R-ApoE基因、PC12-ApoE4组细胞H-ApoE-FLAG基因的mRNA的相对表达量的中位数分别为1.00、1.01和148.74;其中,PC12组与PC12-NC组细胞R-ApoE基因的mRNA的相对表达量均低于PC12-ApoE4组细胞H-ApoE-FLAG基因（P〈0.01）。麦芽酚铝染毒后,细胞存活率在染毒剂量及细胞类型的主效应以及交互效应上均有统计学意义（P〈0.01）;其中,麦芽酚铝在0.00-400.00μmol/L浓度下,随着染毒剂量的增加,2种细胞的细胞存活率均降低,均呈剂量-效应关系（P〈0.01）。结论 成功构建稳定表达人源性ApoE4基因的细胞株。麦芽酚铝和ApoE4基因对PC12细胞存活率的影响存在交互作用,ApoE4基因可增强麦芽酚铝对PC12细胞的细胞毒性。
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