作者：朱小娟; 武俏颖; 兰姗; 郭汉城活性vitd3基因沉默解耦联蛋白2氧化应激
摘要：目的：观察1,25-二羟维生素D_3（1,25-dihydroxyvitamin D_3,1,25-（OH）_2Vit D_3）及其受体（vitamin D receptor,VDR）对高糖诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）解偶联蛋白2（UCP2）表达及氧化应激的影响,探讨1,25-（OH）_2Vit D_3在糖尿病肾病（DN）进展中的作用。方法：利用RNAi技术构建基因干扰表达载体质粒p GIPZ-VDR,脂质体介导质粒转染HK-2细胞,构建稳定转染细胞系。细胞分组：未转染低糖对照组（NG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖）、稳转低糖控制组（CG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖）、未转染高糖诱导组（HG组,30 mmol/L D-葡萄糖）、稳转高糖诱导组（THG组,30 mmol/L D-葡萄糖）、未转染高糖＋Vit D_3处理组（VG组,30 mmol/L D-葡萄糖＋10-7mol/LVit D_3）、稳转高糖＋Vit D_3处理组（TVG组,30 mmol/L D-葡萄糖＋10-7mol/LVit D_3）、稳转高渗对照组（MG组,5.5 mmol/L D-葡萄糖＋24.5 mmol/L D-甘露醇）、稳转无水乙醇溶剂对照组（SG组,30 mmol/L D-葡萄糖＋6.86×10-2mmol/L无水乙醇）。实时荧光定量PCR及Western blot法检测HK-2细胞中VDR及UCP2的mRNA和蛋白表达;比色法检测胞内总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力和丙二醛（MDA）水平。结果：（1）稳转细胞中VDR mRNA和蛋白表达显著低于转染空载质粒组（P〈0.01）;（2）与CG组比较,HG组、THG组、TVG组中T-SOD活力均降低（P〈0.05）而MDA水平均显著升高（P〈0.05）,但此三组之间比较T-SOD活力及MDA水平差异无统计学意义（P〉0.05）;与THG组比较,VG组T-SOD活力显著升高（P〈0.05）,MDA水平显著下降（P〈0.05）;（3）与NG组比较,CG组UCP2 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）;与CG组比较,HG组和THG组UCP2mRNA及蛋白表达显著升高（P〈0.05）,但此二组之间差异无统计学意义;与THG组比较,VG组UCP2mRNA和蛋白表达显著下降（P〈0.05）,而TVG组UCP2mRNA和蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：沉默VDR基因并不影�
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