下调miR-221表达抑制子宫颈癌细胞恶性生物学行为及其作用机制

作者：潘雨露; 石翠格; 吴淑霞; 任兴业子宫颈癌细胞凋亡恶性生物学行为作用机制

摘要：目的：探讨下调miR-221表达对子宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响及其作用机制。方法：运用脂质体2000转染法将miR-221抑制剂和阴性对照核苷酸片段（NC）转染子宫颈癌细胞HeLa、C33A、SiHa和Caski细胞，用Western blotting和Real-time PCR分别检测ARID1A（miR-221靶蛋白）、cleaved caspase 3、caspase 3、cleaved PARP、PARP、MMP-9、MMP-13、TIMP-3蛋白表达水平和miR-221、 MMP-9、MMP-13、TIMP-3 mRNA的表达水平；用MTT法、克隆形成实验、AnnexinV-FITC/PI染色结合流式细胞术分别测定细胞增殖、克隆形成率和细胞凋亡率。结果：与阴性对照组比较,（1）miR-221抑制剂转染的HeLa、CC3A、SiHa和Caski细胞miR-221表达量均显著降低[（0.23±0.01）、（0.31±0.02）、（0.34±0.01）、（0.37±0.02），F=25.44，P〈005]；（2）转染的细胞随着培养时间的增加细胞存活率逐渐下降，具有时间依赖效应，48 h之后细胞存活率显著低于阴性对照组（F=37.42，P〈0.05）；细胞的克隆形成率显著降低（F=43.58，P〈0.05）；培养72 h时细胞凋亡率分别为：HeLa（27.92±3.47）% 、C33A（20.84±4.31）%、SiHa（18.81±2.18）% 、Caski（19.86±3.82）%，均显著高于对照组（F=54.78，P〈005）;（3）转染细胞下调miR-221表达后促进cleaved caspase 3、cleaved PARP、TIMP-3蛋白表达，抑制MMP-13蛋白表达； 降低MMP-13 mRNA表达（t=37.50，P〈0.05），增加TIMP-3 mRNA表达（t=46.30，P〈0.05）。结论：下调miR-221表达能抑制子宫颈癌细胞的恶性生物学行为，其机制与激活caspase信号通路从而诱导细胞凋亡以及调控MMP-13和TIMP-3的表达有关。

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