作者：邓东灵; 孔庆涛; 张媛媛; 袁红珊; 刘慧; ...新生隐球菌漆酶原核表达包涵体
摘要：目的构建含His-tag的新生隐球菌漆酶的原核表达载体并表达鉴定.方法利用PCR技术扩增LAC1基因的编码序列,将其正确插入pET-28a（＋）载体中得到重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后进行PCR鉴定及基因测序.将正确重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,通过不同条件进行诱导表达,用SDS-PAGE电泳及MALDI-TOF质谱检测并鉴定目的蛋白质.通过尿素对包涵体蛋白进行变性,并对变性后的蛋白进行SDS-PAGE电泳及MALDI-TOF质谱检测.结果成功构建含His-tag的新生隐球菌漆酶的原核表达载体,PCR鉴定呈阳性且基因测序结果与目的序列-致,SDS-PAGE显示在大肠杆菌BL21中成功诱导表达出相对分子质量（Mr）约为68000的目的蛋白,经MALDI-TOF质谱鉴定目的蛋白在此表达系统中不可溶,可能以包涵体形式存在.结论成功构建含His-tag的新生隐球菌漆酶的原核表达载体,为进-步纯化并解析新生隐球菌漆酶的晶体结构奠定了基础.
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