作者：刘伟霞; 孙毅; 万喆; 李若瑜; 刘伟黄曲霉唑类cyp51抗真菌药物敏感性
摘要：目的通过构建黄曲霉cyp51同源基因额外拷贝株,研究这些基因对抗真菌药物敏感性的影响。方法通过序列同源性比对,在黄曲霉基因组中找出其cyp51基因的开放读码框（ORF）及其上下游约1 000 bp的基因序列,PCR扩增后利用DNA重组技术将该片段克隆到穿梭质粒pRG3-AMA1-NotI;用重组后的质粒和空质粒转化烟曲霉嘧啶营养缺陷株（pyrG-）AF293.1,并利用美国临床实验室标准化研究所（CLSI）M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定转化株对两性霉素B（AMB）、伊曲康唑（ITC）、伏立康唑（VRC）、泊沙康唑（POS）和卡泊芬净（CAS）敏感性。结果黄曲霉cyp51同源基因有3个：cyp51A、cyp51B和cyp51C,ORF大小约为1 400～2 000 bp;将其克隆到穿梭质粒pRG3-AMA1-NotI产生重组质粒pRG3-AMA1-CYP51A、pRG3-AMA1-CYP51B和pRG3-AMA1-CYP51C;连同空质粒转化AF293.1后得到阳性转化子rC-YP51A、rCYP51B、rCYP51C和rpRG;微量液基稀释法和E-test法显示,rCYP51A和rCYP51B对VRC和ITC交叉耐药,对AMB和CAS敏感;rCYP51C和rpRG对VRC和ITC中度敏感,而对AMB和CAS敏感。结论额外拷贝黄曲霉cyp51A或cyp51B基因影响烟曲霉对唑类药物的敏感性,对AMB和CAS的敏感性没有影响;额外拷贝黄曲霉cyp51C对测试药物的敏感性没有明显影响。
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