作者：刘馨; 王辉辉; 何秋玲; 马雁冰肝炎自身免疫性表位b淋巴细胞细胞色素p450cyp2d6
摘要：目的研究在大肠杆菌中以重组病毒样颗粒形式表达的人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白CYP2D6主要抗原表位aa262—270免疫小鼠后对构建小鼠自身免疫性肝炎模型的效应。方法设计人Ⅱ型自身免疫性肝炎标志蛋白主要抗原表位aa262—270（WDPAQPPRD）的正负链寡核苷酸片段，经退火后插入表达乙肝核心蛋白HBcAg的质粒pNP中（pNP质粒山pThioHisA质粒插入HBcAg基因片段构建而成）。构建成质粒pNP．AIH2；转染大肠杆菌DH5ct感受态细胞；以IPTG诱导重组蛋白表达，经硫酸铵沉淀、洗涤，密度梯度离心纯化和脱盐后，肌肉注射免疫小鼠3次，以ELISA和westernblot检测免疫后小鼠特异性抗体的产生和水平，通过转氨酶检测和肝脏石蜡切片HE染色观察炎症反应。结果SDS—PAGE结果显示重组菌诱导表达的目的蛋白分子量为19kD，与预期相符；电镜证实其以可溶性的病毒样颗粒形式存在；ELISA显示，免疫小鼠血清与包被的肝脏匀浆蛋白特异反应，检测到持续存在的特异抗体，滴度至少为1：2000；westernblot检测表明，抗血清在分子量约为55kD的地方产生了一个特异的条带，与小鼠CYP2D6蛋白大小一致。与正常对照相比，实验组小鼠转氨酶水平未明显升高，肝切片HE染色没有观测到明显的病理特征。结论携带人II型自身免疫性肝炎标志蛋白CYP2D26主要表位的病毒样颗粒免疫小鼠后，可刺激产生较强的特异抗体水平，但在观测时间内，未见诱导小鼠产生明显的肝脏炎症反应。
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