作者:王丽; 贾晓健; 姜华军; 杜郁; 杨帆; 司书...抗原cd36rna加工转录后荧光素酶类半衰期
摘要:目的考察人高密度脂蛋白受体SR—BI基因3'UTR对其mRNA稳定性的影响。方法以人肝癌细胞株HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增获得SR.BI基因mRNA3'UTR全长序列,克隆至荧光素酶报告基因的下游,分别构建重组质粒pc.1uc.3’UTR以及pGL3-CLAp—luc-3’UTR。利用脂质体转染HepG2细胞,进而检测转染后细胞的荧光素酶活性、荧光素酶报告基因mRNA的表达水平以及荧光素酶报告基因mRNA的半衰期。结果通过PCR成功扩增获得人SR—BI基因3’UTR全长序列,分别构建重组荧光素酶报告质粒pc-luc-3’UTR以及pGL3一CLAp—luc-3’UTR,并以pGL3一CLap-luc-3’UTR转染HepG2细胞建立稳定转染细胞株CLAp-luc.3’UTRHepG2。通过荧光素酶活性检测、实时荧光定量RT-PCR以及mRNA半衰期检测,结果证实SR.BI基因的3'UTR的存在可显著降低荧光素酶活性及其mRNA水平,mRNA半衰期也显著缩短。结论SR—BI基因3'UTR对其mRNA的稳定性有显著的影响,是SR.BI基因转录后水平调控的关键,为SR.BI基因表达调控提供了一个新机制。
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