作者：张果; 昌晓红; 成夜霞; 叶雪; 程洪艳; 魏...卵巢肿瘤重组融合蛋白质类hsp70热休克蛋白质类抗体包涵体
摘要：目的探讨大肠杆菌表达的卵巢癌抗独特型单链抗体／小鼠热休克蛋白70（6811ScFv／mHSP70）融合蛋白包涵体变性、复性条件，以确定其最佳体外复性条件。方法大肠杆菌表达大量融合蛋白6811ScFv／mHSP70：①比较不同的裂解液（8mol／L尿素和6mol／L盐酸胍）对包涵体的裂解效率及其对复性蛋白活性的影响；②探索序贯稀释方法，以及氧化还原环境和复性液中不同浓度L-精氨酸对蛋白稀释复性的影响；③比较稀释复性和柱。卜复性对融合蛋白复性效率及活性的影响。采用Bradford法测定包涵体裂解液与复性后蛋白浓度。所有复性蛋白活性的检测均采用ELISA方法。结果以包涵体形式表达6811ScFv／mHSP70蛋白：①经6mol／L盐酸胍裂解包涵体的效率远高于8mol/L尿素，但前者复性所得蛋白活性低，6mol／L盐酸胍彻底裂解的包涵体经8mol／L尿素透析后再复性，复性效率显著提高；②序贯稀释方法可提高蛋白复性效率；加入0．5mol／L L-精氨酸可降低稀释复性过程中蛋白聚集物的产生，提高复性效率；加入还原型谷胱甘肽（GSH）与氧化型谷胱甘肽（GSSH）浓度比为1：5时，可提高复性后蛋白活性；③柱上复性可一步完成蛋白的复性和纯化，所得蛋白纯度较高，但复性效率和复性后蛋白活性较稀释复性低。结论本研究建立了6811ScFv／mHSP70融合蛋白的最佳复性条件：包涵体经6mol／L盐酸胍彻底裂解后，再经8mol／L尿素透析，然后进行序贯稀释复性，且复性液中加入0．5mol／L L-精氨酸和GSH：GSSH=1：5以提高复性效率和蛋白活性，为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
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