作者：王云龙; 朱永喜; 李玉林; 霍雯; 李恒思; ...圆环病毒属疫苗亚单位重组蛋白质类dna
摘要：目的通过基因工程的方法表达猪圆环病毒2型的ORF2蛋白，并对表达蛋白进行小鼠免疫效力评价，为猪圆环病毒病疫苗的研制提供技术支持。方法根据GenBank中猪圆环病毒2型（PCV-2）ORb-2基因序列，设计了1对引物。从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）的死亡仔猪病料中提取基因组DNA，用PCR方法扩增出ORF2去信号肽基因，将该基因克隆至原核表达载体pET32a，获得重组质粒，经PCR、酶切以及序列分析鉴定，表明插入的片段为目的基因，插入的位置、大小和阅读框均正确，成功构建了重组质粒pet32a-ORF2，阳性重组质粒转化大肠杆菌Btgold（DE3），用IPTG诱导表达并确定表达的最佳条件，表达产物经纯化后，以每只小鼠0．2mg免疫5周龄的雌性小鼠，然后用ELISA检测免疫小鼠血清中抗体的产生情况。结果纯化的重组蛋白能使小鼠产生了抗猪圆环病毒的特异性抗体，从第7d开始产生抗体，第28d抗体水平达到最高，抗体可维持7周以上，并具有良好的安全性。结论表达目的蛋白能在小鼠体内产生特异性抗体，为进一步研究猪圆环病毒亚单位疫苗奠定了基础。
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