作者：江杨华; 杨月珍; 朱娟莉; 陈超细胞色素p450cyp2d6多态性单核苷酸突变半数抑制浓度
摘要：目的探讨单核苷酸替换对人细胞色素P450 CYP2D6酶活性及其与药物相互作用的影响。方法体外构建CYP 2D6野生株（WT）和G169R、P34S、FA10K、V7M等4个单核苷酸突变株的表达载体并在酿酒酵母中诱导表达，裂解行提取锌酶的蛋白微粒体，用蛋白质印迹法验证其表达，冉分别测定各酶代谢底物丁夫洛尔和3-[2-（N，N二乙基-N-甲铵）乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素（AMMC）的米氏常数（Km）和最大酶促反应速度（Vmax）。以AMMC为底物对CYP2D6wT和V7M、G169R进行高通量药物抑制实验，所选药物包括已知的2D6抑制剂（奎尼丁、舍曲林）、底物（氯丙嗪、氟西汀、阿米替林）和既非抑制剂又非底物的化合物（酮康唑、曲格列酮），求得不同药物对不同酶的半数抑制浓度（IC50）。结果蛋白质印迹法检测显示各酶均表达良好。CYP2D6WT代谢丁呋洛尔和AMMC的Km值分别为19．22、2．06μmol、L^-1，Vmax值分别为154．53、21．60pmol·min^-1·mg^-1，Vmax／Km值分别为8．04、11．49μmin·m^-1。与CYP2D6WT比较，V7M代谢2种底物的Vmax值均要高得多（P〈0．05），G169R和E410K均稍低，而P34S都要低很多（P〈0．05）：各突变株的Km值也发生了或多或少的改变。药物对CYP2D6WT和V7M和G169R的抑制程度排序均为奎尼丁〉氯丙嗪〉氟西汀〉阿米替林〉舍曲林〉酮康唑／曲格列酮；药物对V7M和G169R的IC50值与CYP2D6WT的IC50值比值，奎尼r分别为0．88和0．80，氯丙嗪0．54和0．80，氟西汀0．65和1．02，阿米替林0．85和0．71，舍曲林0．43和0．74。结论CYP2D6部分单核苛酸突变株的酶动力学特征与野生株有明显差异，单核苷酸替换可导致酶对药物抑制的敏感性发生变化。
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