作者：夏小慧 杨爱宏 胡扬kcnj11基因多态性膜片钳细胞膜电流
摘要：目的：KCNJ11基因E23K多态与心血管疾病、糖尿病等相关联，本实验通过研究人KCNJll基因外显子处E23K多态对细胞膜电流密度的影响，探讨其与相关疾病关联的机制。方法：普通PCR法扩增KCNJll基因外显子，重叠延伸PCR法使多态位点G—A突变，基因重组法将KCNJll基因外显子（分别含23E和23K等位基因）插入pcDNA3．1／Cr-GFP真核表达载体，脂质体转染法分别将重组质粒pcDNA3．1-KCNJll（E）和pcDNA3．1-KCNJll（K）转入HEK293T细胞。采用全细胞膜片钳技术，检测转染不同质粒的细胞膜电流密度。结果：PCR扩增获得长度为1173bp的KCNJll基因外显子，成功构建pcDNA3．1-KCNJ11（E）和pcDNA3．1-KCNJll（K）重组表达载体。全细胞膜片钳检测结果显示，两组转染不同质粒的HEK293T细胞表面均检测到正电流和负电流，细胞表面翻转电压均为50rTlV。两组细胞相比，转染pcDNA3．1-KCNJ11（E）质粒的细胞表面电流明显高于转染pcDNA3．1-KcNJ11（K）质粒的细胞（P〈0．05，n=10）。结论：KCNJll基因外显子E23K多态能导致细胞膜电流发生改变，为进一步研究多态位点与相关疾病的关联机制提供实验基础。
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