作者：吴航宇; 蔡春青; 邹飞相对定量中性粒细胞
摘要：目的：探讨单个中性粒细胞中白介素-8β型受体（IL-8Rβ）mRNA的表达丰度。方法：采用倍比稀释相对定量单细胞RT-PCR方法分离纯化人外周血中性粒细胞并提取总RNA，针对IL-8RβmRNA设计引物，进行RT—PCR确认IL-8Rβ在中性粒细胞中的基因表达并优化反应条件。收集单个中性粒细胞胞内容物或完整细胞，以相同引物进行RT反应，再将后者所得的cDNA倍比稀释后，与前者共同经过两轮PCR扩增，并将最终产物以BamHI内切酶酶切鉴定产物的特异性。结果：IL-8RβmRNA在人中性粒细胞中有大量表达，单个中性粒细胞中亦能扩增出特异性的IL-8Rβ目的条带，并且将单个细胞内mRNA稀释100倍后仍可扩增出目的条带，BamHI内切酶酶切反应证实为目的产物。结论：人中性粒细胞表达IL-8RβmRNA，mRNA倍比稀释单细胞RT—PCR方法确认其丰度远高于一般mRNA含量，且此方法可在单细胞水平比较细胞内mRNA的丰度。
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