作者：袁瑗; 边延林; 张宝红; 朱建伟稳定转染细胞株筛选有限稀释法
摘要：本研究在实验室前期构建的敲除α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株(FUT8-/--CHO-S)基础上,建立了稳定表达IgG1型抗HER2单克隆抗体的稳转细胞株。以曲妥珠单抗为模式蛋白,构建了带有嘌呤霉素抗性基因的表达载体pIRES-HC和pIRES-LC,并用电穿孔法共转染入FUT8-/--CHO-S细胞,通过嘌呤霉素加压培养、Dot Blot和WesternBlot等检测方法,经过两轮有限稀释筛选出了高表达的稳转细胞株Tru-FUT8-/--CHO-S。该细胞株在批次培养(Batch)中最高生长密度达每毫升6.05×106个,抗体产量为168 mg/L。在补料培养(Fed-Batch)中,通过补料CHO Feed4的添加,最高生长密度提高到每毫升17.1×106个,抗体产量达到437 mg/L,试验结果表明改造的FUT8-/--CHO-S细胞株具有开发成工业细胞株的潜力。
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