作者：高正平; 钱岚; 刘琼; 易茂华; 韩伟正交试验设计单链抗体包涵体包涵体变性包涵体复性
摘要：单链抗体（single-chain variable fragment,scFv）包涵体的变性和复性受p H值、温度、盐浓度、氧化还原电对、添加剂等多种因素影响,快速找到合适的变、复性条件是蛋白质纯化的重点和难点。本试验以scFv-Z2为研究对象,通过正交试验设计筛选scFv-Z2包涵体的变性和复性条件,找出关键的影响因素,得到最适变性条件：6 mol/L盐酸胍变性,变性时间24 h;最适复性条件：以4 mol/L尿素、1 mol/L精氨酸（Arg）、1 mmol/L还原型谷胱甘肽（GSH）和0.02 mmol/L氧化型谷胱甘肽（GSGG）的溶液为复性液,样品与复性液比例为1∶30,复性时间7 d。通过SP阳离子柱分离后得到高纯度（99.2%）scFv-Z2单体,经工艺放大重复验证,最终开发出稳定可靠的纯化工艺路线。本研究建立了正交试验设计在scFv-Z2包涵体纯化工艺开发中的新应用。
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