作者:龚家玮; 胡又佳大肠杆菌fas可溶性重折叠配基重组人sun基质金属蛋白酶生物学活性纯化表征癌症治疗蛋白基因折叠过程膜蛋白dnahis过表达自由度稀释法变性凋亡细胞体形
摘要:Fas配基(FasL)是一种Ⅱ型膜蛋白,通过基质金属蛋白酶切割可获得具生物学活性的可溶性形式(sFasL)。sFasL会诱导耐Fas细胞的凋亡,而这一特殊的生物学活性也许可用于癌症治疗。然而,蛋白的三聚体形式使重组sFasL很难获得。本研究将sFasL DNA融合在硫氧还蛋白基因的氨基端,在羧基端加上His标签,在大肠杆菌中过表达。为了限制后继重折叠过程的自由度,将重组sFasL溶于6mol/L尿素,在变性条件下固定于镍树脂。通过逐步稀释法将固定的重组sFasL与过量的变性sFasL共同温育进行重折叠。
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