作者：杨奕; 宋还雷; 钱林溪重组蛋白表达原核表达载体mbsdl蛋白蛋白纯化
摘要：目的构建小鼠胆盐依赖脂肪酶（BSDL）重组蛋白的大肠埃希菌原核表达载体,制备具有生物学活性的小鼠BSDL蛋白。方法首先应用PCR合成m BSDL的cDNA序列,克隆至原核表达载体p ET-28b,转化大肠埃希菌表达菌种BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导重组蛋白表达。使用His Trap FF crude柱纯化重组m BSDL蛋白。Western blot鉴定后采用尿素浓度梯度降低法进行透析复性。结果成功构建原核表达载体pET-28b-m BSDL,实现该蛋白在E.coli BL21（DE3）表达菌种中的高效表达,并且表达蛋白主要存在于包涵体中。Western blot示获得较好的纯化效果且纯化后成功复性。结论成功构建m BSDL基因的原核表达质粒并制备具有活性功能的胆盐依赖脂肪酶,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
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