作者：汤建光; 唐北沙; 谭利明; 张玉虎; 曹立; ...神经母细胞瘤细胞抑制作用基因表达rnai质粒介导人survivin基因western印迹短发夹rna表达质粒rna干扰核苷酸序列rna序列瘤细胞株设计合成重组质粒寡核苷酸蛋白水平mrna基因治疗pcr表达量
摘要：目的构建Survivin的短发夹RNA表达质粒并通过由其介导的RNA干扰来下调神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞中Survivin的表达.方法针对人Survivin的Mrna序列设计合成两对寡核苷酸序列,退火后将其连入Pbshh1,对重组质粒Pbshh1-S1和Pbshh1-S2进行酶切和测序鉴定,然后将质粒转染SH-SY5Y细胞,运用RT-PCR和Western印迹检测Survivin基因的表达.结果酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被克隆到Pbshh1,Pbshh1-S1和Pbshh1-S2转染SH-SY5Y细胞后,Survivin基因的Mrna以及蛋白水平的表达量均受到明显抑制.结论成功构建了人Survivin基因的短发夹RNA表达质粒,并在SH-SY5Y细胞中验证了它们对Survivin基因的表达抑制作用,为神经母细胞瘤等肿瘤的基因治疗研究奠定了基础.
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