作者：孙琳琳; 段明靖; 马继超; 艾静心肌梗死微管外泌体
摘要：目的观察心肌梗死(MI)小鼠心脏高表达的微RNA-1(miR-1)能否进入脑组织,影响神经元功能及其分子机制。方法采用左冠状动脉结扎(LCA)4周建立C57BL/6小鼠MI动物模型。透射电子显微镜技术观察海马微管的超微结构。Western蛋白印迹实验和PCR实验检测miR-1水平和TPPP/P25蛋白表达。双荧光素酶报告实验技术、AMO-1和miR-masking离体转染技术和海马立体定位注射慢病毒载体(lenti-pre-AMO-miR-1)技术验证TPPP/P25与miR-1的靶点关系。应用心脏过表达miR-1的Tg小鼠和离体细胞共培养技术验证miR-1在心脑或其细胞之间的传递。利用LCA同时腹腔注射外泌体合成释放抑制剂GW4869,观察心脏外泌体的合成和释放被抑制时miR-1是否还能介导心脑交流。结果①MI小鼠血液及海马中miR-1的表达均升高,在海马中观察到微管溶解损伤,且微管相关蛋白TPPP/P25表达下降。②海马立体定位注射慢病毒载体(lenti-pre-AMO-miR-1)可以逆转MI小鼠海马中miR-1的升高和微管溶解损伤。离体实验发现,TPPP/P25蛋白表达随miR-1过表达而下降;随miR-1受抑制而上升;随本身结合位点的突变而脱调控作用,证实TPPP/P25是miR-1潜在靶蛋白。③利用2VO动物模型模拟MI引发的脑低灌注状态发现,海马组织中miR-1的水平没有明显变化,同时体外神经元细胞缺氧后miR-1的水平也没有明显变化。
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