作者：张勤丽 牛侨 张玲 王亮程序性坏死半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3细胞死亡神经系统中毒铝
摘要：目的探讨程序性坏死（necroptosis）在铝致神经细胞死亡中的作用，以完善铝致神经细胞死亡的机制研究。方法用4mmol·L^-1AlCl3·6H2O染毒神经母细胞瘤细胞SH-SYSY制作铝致神经细胞死亡模型，用RNA干扰技术（RNAi）抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）3基因的表达；用程序性坏死的特异性阻断剂necrostatin-1（Nec-1）抑制程序性坏死的产生。检测不同处理、处理后不同时间点细胞的活力变化，荧光定量PCR法检测RNAi效率，流式细胞仪检测细胞的凋亡率及坏死率改变，免疫组织化学法检测蛋白表达量的差异。结果通过细胞活力在不同小干扰RNA（siRNA）序列、不同转染剂量、不同作用时间点的变化，找到其最适转染浓度为10nmol·L^-1，最适作用时间为转染后48h。通过RNAi抑制caspase3基因表达的差异，筛选出最有效序列为caspase3 siRNA1序列；荧光染色并观察计数表明caspase3 siRNA的转染效率为93．0％，其干扰效率为63．0％，对caspase3蛋白表达有显著的阻抑效应。Caspase3 siRNA单独作用于染铝SH-SY5Y细胞，可以显著提高细胞活力，降低其凋亡率；Nec-1单独作用于染铝SH-SY5Y细胞可以显著提高其细胞活力，降低细胞坏死率；共同作用在染铝SH—SY5Y细胞时两者有增强作用，可以显著提高细胞活力，并同时降低SH—SY5Y细胞的凋亡率及坏死率。结论在铝致神经细胞死亡的机制中，除了传统上认为的凋亡和坏死途径外，还有程序性坏死的存在。
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