作者：钱红; 胡柯; 刘理静; 谢明; 武衡; 李文军...表皮生长因子受体信号传导蛋白和转录激活物3神经胶质原纤维酸性蛋白星形胶质细胞小干扰rna
摘要：目的探讨微小RNA-7（miR-7）对星形胶质细胞活化的影响及分子机制。方法培养大鼠皮层星形胶质细胞,分别用培养液（对照组）、睫状神经营养因子（CNTF,用于活化星形胶质细胞）、miR-7 mimic＋CNTF、miR-7 mimic control＋CNTF、miR-7 inhibitor＋CNTF及miR-7 inhibitor control＋CNTF处理,采用荧光实时定量PCR（q RT-PCR）检测神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和表皮生长因子受体（EGFR）mRNA表达,通过Western blot检测GFAP、EGFR、信号传导蛋白和转录激活物3（STAT3）、磷酸化STAT3（p-STAT3）蛋白表达。构建野生型pGL3-EGFR及突变型p GL3-EGFR-m重组质粒,分别与miR-7 mimic共转染HEK293T细胞,检测荧光素酶报告基因活性。此外,以EGFR si RNA或STAT3抑制剂S31-201处理星形胶质细胞,再与miR-7 inhibitor和CNTF孵育,然后用q RT-PCR、Western blot检测GFAP m RNA与蛋白表达。结果 CNTF组GFAP、EGFR表达水平及pSTAT3/STAT3比值较对照组增加（P〈0.01）,与CNTF组比较,miR-7 mimic＋CNTF组GFAP、EGFR表达水平及pSTAT3/STAT3比值降低,miR-7 inhibitor＋CNTF组GFAP、EGFR表达水平及p-STAT3/STAT3比值升高（P〈0.01）。与对照组比较,miR-7 mimic转染明显减少野生型EGFR荧光素酶活性（P〈0.01）。EGFR si RNA或S31-201预处理几乎完全逆转miR-7 inhibitor诱导的GFAP表达上调（P〈0.01）。结论 miR-7通过抑制EGFR/STAT3信号通路拮抗CNTF诱导的大鼠星形胶质细胞活化。
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