作者：陈雅; 李静; 张文政; 罗敏; 傅晓钟; 刘亭ntcpegfp稳定转染牛磺胆酸hek293细胞高效快速
摘要：目的高效快速地建立稳定高表达钠离子-牛磺胆酸共转运多肽（sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP）的HEK293细胞系。方法构建可表达EGFP-NTCP融合蛋白的p EGFP-NTCP重组质粒,并利用Fu GENE 6转染试剂将重组质粒转染至HEK293细胞中。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,挑选转染细胞进行14 d G418筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株。用RT-PCR法、qRT-PCR法和Western blot技术检测稳定转染细胞及正常细胞中NTCP mRNA和蛋白的表达情况,并进一步用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）考察稳定转染细胞的牛磺胆酸摄取能力。结果使用本文优化的方法,细胞转染率可达90%。RT-PCR、qRT-PCR、Western blot和牛磺酸摄取实验结果显示：相对于正常组,在荧光显微镜下呈绿色荧光的转染细胞;其NTCP表达均显阳性（P〈0.01）;且稳定转染细胞的牛磺胆酸摄取能力明显升高（P〈0.05）。结论高效快速地建立了稳定高表达NTCP的HEK293细胞系,为胆酸衍生物摄取机制研究奠定了基础。
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