作者：陈振花; 吕秋军; 温利青; 叶棋浓; 曹颖林...信号通路药物筛选模型报告基因ecv304细胞特异性诱导表达阳性克隆基因表达水平
摘要：目的建立基于报告基因和干扰素-α(Interferon-α)信号通路的药物筛选模型,用于筛选具有IFN-α样活性的小分子化合物.方法构建带有ISRE(IFN-α stimulated response element)靶序列和报告基因的诱导性表达载体,并将其转染入血管内皮细胞(ECV304)中,筛选报告基因碱性磷酸酶(SEAP)表达受IFN-α诱导的阳性克隆.选取相关的细胞因子干扰素-β、干扰素-γ和生长因子甲状旁腺素(PTH)进行模型特异性考察.结果 ECV304细胞中SEAP的表达受IFN-α的诱导并呈现剂量依赖关系,IFN-α的最高诱导表达率是IFN-β最高诱导表达率的9.0倍、IFN-γ的8.8倍、PTH的9.1倍,具有相对特异性.IFN-α对ECV304细胞无增殖作用.本方法的Z'-因子为0.8,说明此模型具有很好的稳定性.结论本模型的SEAP基因表达水平能够被其特异性配体强诱导表达,利用此模型在96孔板上用化学发光法测定SEAP基因的诱导表达水平可筛选具有IFN-α样活性的小分子化合物.
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