作者：刘华雷; 王志亮; 周滨; 陈溥言鼠白血病病毒禽流感病毒hsn1亚型血凝素假病毒裂解位点
摘要：目的通过RT—PCR反应获得了H5N1亚型禽流感病毒完整的血凝素基因（HA）并克隆到真核表达载体pcDNA3上，通过转染293T细胞进行了瞬时表达验证。方法采用PCR定点突变技术，将其HA基因裂解位点的氨基酸组成由RKKR↓GLF突变为RSSR↓GLF，使其具有低致病性AIV的分子特征，并构建了表达突变后HA基因的真核表达载体pcDNA—Hm。将pcDNA—H5和pcDNA—Hm分别与MuLV假病毒构建体系的两种质粒pHTT60和pHIT111共转染转化了SV40大T抗原的人胚肾细胞293T后，收集转染细胞上清，通过Western—blot和细胞感染性实验来研究假病毒的特性。用缺乏囊膜蛋白和已经证实可以形成MuLV假病毒的水泡性口炎病毒糖蛋白G作为对照。结果转染后形成假病毒进行裂解后进行Westem—blot证明两种HA蛋白都能够整合到各自的假病毒颗粒表面，野生型的HA可以检测到三条带，分别与HA0、HA1和HA2大小相符，而突变后的HAm则仅能检测到一条带，与HA前体大小相符，说明其失去了裂解活性。通过感染293T、COS-7和NIH3T3三种不同的靶细胞后发现野生型的HA所形成的假病毒MuLV—H5具有感染性和泛嗜性，而突变后的HA所形成的假病毒则失去了感染性。结论可以得出HA蛋白裂解位点的氨基酸组成不仅对H5亚型禽流感病毒的致病性有影响，对禽流感病毒侵入细胞也具有至关重要的作用。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
