作者：吕让 王丹 宋彩玲 齐宾宾 刘明跨膜丝氨酸蛋白酶2逆转录病毒mdck细胞系tmprss2
摘要：为建立稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2（TMPRSS2）基因的MDCK细胞系,本研究采用RT-PCR扩增TMPRSS2基因,克隆于逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-TMPRSS2.采用脂质体转染的方式将重组质粒pLXSN-TMPRSS2、pGP和pE-ampho共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒.将逆转录病毒样颗粒感染MDCK细胞,经G418加压筛选和有限稀释法克隆及RT-PCR和间接免疫荧光（IFA）等试验的鉴定,建立了稳定表达TMPRSS2基因的MDCK细胞系.此外,红细胞凝集试验和IFA结果还显示,流感病毒可以在无外源胰酶存在的条件下在该细胞系中增殖,从而为流感细胞培养型病毒株的大规模生产奠定了基础.
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