作者：侯绍华; 彭金美; 周涛; 袁秀芳; 汪明; 童...囊膜蛋白密码子优化
摘要：马传染性贫血病毒（Equine infectious anemia virus，EIAV）的密码子使用频率与哺乳动物间存在着明显差异。为此，对马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株（DLA-EIAV）囊膜全长基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行了重新设计和合成，并以此为基础通过重叠延伸PCR、限制酶切等方法得到结合型和分泌型囊膜基因，将其插入含有鸡beta-actin／兔beta-globin复合启动子（AG）的高效表达载体pCAGGS中，构建了EIAV驴白细胞弱毒疫苗株结合型和分泌型囊膜基因的DNA疫苗质粒pCAGGS-opti-bou-env、pCAGGS-opti—sec-env。将构建的质粒纯化后分别转染293T细胞，以间接免疫荧光和Western blot方法检测转染48h后细胞及上清中囊膜蛋白的表达。结果显示，两种表达质粒均可正确表达EIAV囊膜蛋白，与相对应未优化的表达载体pCAGGS-wt-bou-env和pCAGGS-wt-sec-env相比，密码子优化的基因体外瞬时表达水平有极为显著的提高，而且蛋白表达部位也与预期的结果符合。这一结果为EIAV囊膜蛋白的单抗制备、表位鉴定、免疫试验、新疫苗的开发等奠定了基础。
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