作者：倪建强; 张春玲; 李海燕; 崔尚金; 仇华吉...siv琼脂扩散试验猪流感病毒核蛋白基因表达疾病诊断
摘要：根据GenBank中A／Swine／Hong Kong/126／82(H3N2)株猪流感病毒(SIV)NP基因核苷酸序列设计合成一对引物，经RT-PCR扩增了我国SIV分离株A／Swine/Heilongjiang／3／2000(H3N2)的核蛋白(NP)基因。将扩增所得NP基因克隆于pMDl8-T载体，酶切鉴定后对其序列分析表明NP基因与香港分离株同源性高达93．8％，然后定向亚克隆NP基因于原核表达载体pET30(a)的多克隆位点中，经酶切鉴定后，将含有NP基因的重组质粒命名为pET-NP。用pET-NP转化受体菌BL21，用诱导剂IPTG以不同浓度进行诱导，并在不同诱导时间收集样品。经SDS-PAGE电泳分析证实NP基因获得了表达，并在终浓度为1mM的IPTG诱导下，6h其表达量达到高峰，经Western blot分析证实表达的重组核蛋白具有反应活性，大小约为60kD。用表达产物作琼脂扩散试验，结果表明表达产物与SIV抗血清可形成清晰的反应沉淀线，而与其它9种猪病原阳性血清不发生反应。正常菌体蛋白与SIV阳性血清也不发生反应。通过对40份送检血清样品的检测结果显示其与HI试验的相符率高达95％以上。试验证明利用原核表达系统制备的重组核蛋白作为诊断用抗原，不仅制备过程简单而且所建立的琼扩诊断方法特异、快速、简便，其灵敏度也能满足现地的使用要求。目前正在进行现地的中试试验。
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