作者：韩凌霞; 陈艳; 崔尚金; 王云峰; 仇华吉; ...诊断抗原猪ii型圆环病毒全基因组序列分析orfl基因orf2基因基因克隆基因表达
摘要：猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)的2个主要开放阅读框ORFl和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PKl5细胞系，提取总DNA并以其为模板，通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因，并克隆到pMDl8T载体中，进行了序列测定。将Rep和Cap基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pPROEX^TM中，以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白。根据文献报道，致病性的PCV-2与无致病性的PCVl的型特异性抗原决定簇主要位于Cap基因的羧基端部分，本实验利用原核表达载体pGEX-6p-1融合表达了Cap基因羧基端423bp的片段。通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS-PAGE结果，重组质粒pPRO-Cap和pPRO-Rep以及pGEX-ΔCap的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15．1％、30．4％和19．6％。将表达的三种蛋白作为抗原，通过酶联免疫吸附试验分别与PCV-2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应，pGEX-ΔCap表达的蛋白(Cap蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强，这表明截短的Cap蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV-2感染用候选抗原。
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