作者：惠俊敏 郭延垒 杨竹 李文娟 王应雄 于超色谱法高压液相右美沙芬大鼠微粒体肝右啡烷细胞色素p450cyp2d6
摘要：目的建立大鼠肝微粒体中细胞色素P450（CYP）2D6酶活性的检测方法，以右美沙芬为探针底物进行体外酶动力学分析，为相关药物代谢研究提供参考依据。方法采用高效液相色谱一荧光检测（HPLC—FLD）方法提高检测灵敏度。通过优化大鼠肝微粒体孵育体系的反应条件，建立稳定的动力学评价方法。以Graphpadprism5．01软件绘制米曼动力学曲线并计算V/max与K/m值。结果右美沙芬与其代谢产物右啡烷分离良好且无其他内源性物质干扰。右啡烷检测限为5nmol·L-1（S／N〉3），定量下限为0．015μmol·L～，线性范围为0．015～7．5μmol·L-1。测定方法重现性好且稳定。经优化条件后测定，不同浓度的右美沙芬在0．2mg·mL-1蛋白浓度下，孵育10min，测得动力学参数y/max为（1．075±0．060）nmol·min-1·mg-1 pro，Km为（7．470±0．983）μmol·L-1。结论高效液相色谱结合荧光检测法可以有效提高灵敏度，此大鼠微粒体孵育体系的建立可应用于体外CYP2D6酶活性的测定及酶动力学研究。
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