作者：刘爱萍; 任珍芸; 刘倩; 罗树权; 陈晓航; ...肺炎多糖蛋白结合物破伤风类毒素游离多糖脱氧胆酸钠
摘要：目的：建立6B型肺炎球菌荚膜多糖．破伤风类毒素结合物（PS6B-TT）中游离多糖的测定方法，并对方法进行验证。方法：采用脱氧胆酸钠．盐酸沉淀法（NaDC／HCl），取不同浓度的载体蛋白破伤风类毒素（TT），加入1％NaDC溶液混匀，离心后用Lowrry法检测上清中蛋白含量，以确定载体蛋白沉淀范围；用不同离子强度的氯化钠溶液稀释游离多糖对照品与TT的混合物，NaDC沉淀并离心后以蒽酮．硫酸法测定上清中多糖含量、计算回收率，确定游离多糖的最佳分离条件；以NaDC／HCl沉淀6B型多糖测定标准品并绘制标准曲线，与未经NaDC／HCl沉淀的标准品相比较，确定NaDC对蒽酮硫酸法测定结果的影响；由此建立NaDC／HCl沉淀法结合蒽酮硫酸法测定6B型结合物中游离多糖含量的方法，并对方法的专属性、准确度及精密度进行验证。结果：此方法沉淀载体蛋白浓度应控制在500μg·mL^-1以下；选择终浓度0．3mol·L^-1氯化钠溶液作为6B型肺炎球菌结合物中游离多糖测定的稀释液；NaDC／HCl沉淀法对蒽酮硫酸法测定多糖含量基本无影响；游离多糖对照品与载体蛋白TT混合物经建立的NaDC／HCl法沉淀后多糖及蛋白回收率分别为98．25％及0；游离糖添加试验回收率均在90％～100％；3批结合物游离糖含量测定值其试验内及试验间CV值均在10％以下。结论：本试验建立的NaDC／HCl沉淀法结合蒽酮硫酸法可有效分离6B型游离多糖与多糖蛋白结合物，并能够准确、稳定地测定结合物中的游离多糖含量。
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